如何檢測乳酸菌飲料中的乳酸菌含量？

我們平時喝的酸奶、乳酸菌飲料都含有個關鍵成分——乳酸菌。能從葡萄糖或乳糖的發(fā)酵過程中產(chǎn)生乳酸的有益菌，廣泛存在于人體的腸道中，大部分是具有改善腸道消化功能的作用。那你知道如何檢測乳酸菌飲料中的乳酸菌含量嗎？

如何檢測乳酸菌飲料中的乳酸菌含量？

一、樣本采集

檢樣主要為含乳酸菌活菌的飲料和微生態(tài)制劑，樣本應放入冰箱保存，心快檢驗。

二、檢驗方法（中華人民共和國國家標準  乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學檢驗GB／T 16347-1996）

乳酸菌菌總數(shù)的測定：乳酸菌菌落總數(shù)是指標樣在一定條件下培養(yǎng)后，所得1ml檢樣中所含乳酸菌菌落的總數(shù)。

（一）檢驗程序

乳酸菌菌落總數(shù)檢驗程序如下：

（二）培養(yǎng)基和試劑

改良TJA培養(yǎng)基（改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基）；改良MC培養(yǎng)基（modified Chalmers培養(yǎng)基）；0.1％亞甲藍牛乳培養(yǎng)基；6.5％氯化鈉肉湯參照；pH9.6葡萄糖肉湯；40％膽汁肉湯；淀粉水解培養(yǎng)基；精氨酸水解培養(yǎng)基；乳酸桿菌糖發(fā)酵管；七葉苷培養(yǎng)基；革蘭氏染色液；3％過氧化氫溶液；蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑；明膠培養(yǎng)基；硝酸鹽培養(yǎng)基、硝酸鹽試劑；生理鹽水：定量分裝于三角瓶和試管內(nèi)滅菌。

（三）操作步驟

1．以無菌操作將經(jīng)過充分搖勻的檢樣25ml（或25g）放入含有225ml滅菌生理鹽水的來菌廣口瓶內(nèi)做成1：10的均勻稀釋液。

2．用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1m，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液）。

3．另取1ml滅菌吸管，按上述操作順序，作10倍增稀釋液，如此每遞增一次，即換用1支1ml滅菌吸管。

4．選擇2～3個以上適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度作兩個平皿。

5．稀釋液移入平皿后，應及時將冷至50℃的乳酸菌計數(shù)培養(yǎng)基（改良TJA或改良MC）注入平皿約15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。同時將乳酸菌計數(shù)培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液檢樣用的滅菌生理鹽水的滅菌平皿內(nèi)作空白對照，以上整個操作自培養(yǎng)物加入培養(yǎng)皿開始至接種結(jié)束須在20min內(nèi)完成。

 6．待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36℃±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)72h±3h取出，觀察乳酸菌菌特征，選取菌落數(shù)在30～300之間的平板進行計數(shù)。計算后，隨機挑取5個菌落數(shù)進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查并做過氧氫酶試驗。革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，無芽胞的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據(jù)證實為乳酸菌菌落計算出皿內(nèi)的乳酸菌數(shù)，然后乘其稀釋倍數(shù)即得每亳升樣品中乳酸菌數(shù)。例如，檢樣10－4的稀釋液在改良TJA瓊脂平板上，生成的可疑菌落為35個，取5個鑒定，證實的乳酸菌的4個，則1ml檢樣中乳酸菌數(shù)為：

35×4／5×104＝2.8×105

7．乳酸菌在改良TJA和改良MC培養(yǎng)基上菌落生長形態(tài)特征。

（四）乳酸菌的鑒定

對上述分離到的乳酸菌需進行菌種鑒定時，則作以下試驗。

1．菌種制備  自平板上挑取菌落，接種于改良TJA或改良MC瓊脂斜面，于36℃±1℃，24～48h培養(yǎng)，刮取菌苔，分別進行下列試驗。

2．乳酸桿菌鑒定試驗  極少見還原硝酸鹽，不液化明膠，不產(chǎn)生靛基質(zhì)和硫化氫。

3．常見乳桿菌屬內(nèi)種的碳水化合物反應。

4．產(chǎn)酸乳的鏈球菌的鑒別試驗。